GPS2基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞的永生化及其增殖凋亡的检测

• 作者: 任广明 尹荣华 杨晓明 田欢欢 詹轶群
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠,基因敲除 成纤维细胞 胚胎结构 SV40LT 永生化 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 361-365
• 页数: 5页
• 分类号: Q591.2
• 字数: 4856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.05.001

摘要

目的 利用SV40大T抗原(SV40LT)过表达慢病毒建立永生化的GPS2野生与敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)系,并检测GPS2敲除对MEF增殖及凋亡的影响.方法 构建pCDH-Flag-SV40LT-GFP慢病毒表达载体,并进行病毒包装.分离胚胎发育9.5 d(E9.5d)的MEF细胞,感染SV40LT慢病毒,连续传代培养50代以上,把仍存活且状态良好的GFP阳性细胞视作永生化成功的MEF细胞.利用高内涵细胞成像分析仪检测永生化MEF细胞的增殖情况,采用AnnexinV/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 成功构建pCDH-Flag-SV40LT-GFP慢病毒表达载体,获得滴度为4.03×108 pfu/ml的病毒.分离E9.5d MEF细胞并感染上述病毒,阳性细胞扩大培养并稳定传代50代以上,成功建立了永生化的MEF细胞系.GPS2敲除MEF细胞的增殖能力明显低于野生型,而二者由于血清撤除所引起的凋亡并无明显差异.结论 敲除GPS2抑制MEF细胞的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨晓明		4	14	3.0	3.0
3	詹轶群		2	1	1.0	1.0
6	田欢欢		1	1	1.0	1.0
7	任广明		1	1	1.0	1.0
8	尹荣华		1	1	1.0	1.0