采用多基因联合方法鉴定福建长乐和福清产区马铃薯Y病毒株系组成

• 作者: 沈林林 詹家绥 邹文超 高芳銮
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 马铃薯Y病毒 ELISA 多基因联合序列 系统发育 重组株系
• 年，卷（期）: 2016,（20）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 3918-3926
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.20.006

摘要

[目的]马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是马铃薯生产上危害较为严重的病毒,也是制约马铃薯可持续发展的主要病毒之一.论文旨在开发一套简便、准确、快速的PVY分子鉴定技术,并采用该技术及时查明福建省部分产区PVY病害的发生、分布及PVY株系组成.[方法]采用ELISA方法对采自福建省长乐市、福清市马铃薯种植区疑似受PVY感染的样品进行检测,并根据文献报道的PVY P1、VPg和CP基因保守区设计3对简并引物,对ELISA检测后的阳性样品进行基因扩增、克隆,并将获得的序列进行核苷酸序列一致性、重组位点、基因型分布和系统发育分析.[结果]ELISA检测结果表明,17份样品中有1 3个样品与PVY抗体呈阳性反应,其他呈阴性反应.1 3个阳性样品均能成功扩增出3个与P1、VPg和CP基因预期大小一致的特异片段.BLAST比对分析显示P1、VPg和CP基因与文献报道的已知PVY分离物的核苷酸序列一致性分别为72％-99％、85％-99％和88％-99％.P1、VPg和CP 3个基因联合序列分析显示,FQ01分离物与PVYN-Wi株系的核苷酸序列一致性最高,FQ08分离物与PVYE株系的核苷酸序列一致性最高,CL01、CL02、CL05和CL13 4个分离物与PVYNTN-NW株系SYR-Ⅰ型的核苷酸序列一致性最高,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12 7个分离物与PVYNTN-NW株系SYR-Ⅱ型的核苷酸序列一致性最高.重组分析显示,除CP基因外,长乐市和福清市两个产区的PVY分离物的P1和VPg基因中均检测到显著的重组信号.基因型统计分析结果显示,长乐产区的P1基因为N型(60％)和N×O重组型(40％),VPg基因均为N×O重组型,而CP基因均为O型,而福清产区的P1基因为N型(25％)和N×O重组型(75％),VPg基因为N×O重组型(87.5％)和0型(12.5％),而CP基因除了一个分离物为N型外,其他均为O型.系统发育分析显示分离物FQ01与PVYN-Wi株系聚为一簇,FQ08与pVYE株系聚为一簇,CL01、CL02、CL05和CL13与PVYNTN-NW株系SYR-Ⅰ型聚为一簇,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12与pVYNTN-NW株系SYR-Ⅱ型聚为一簇,表明在系统发育关系上,分离物FQ01与pVYN-Wi株系最近,FQ08与PVYE株系最近,CL01、CL02、CL05和CL13与PVYNTN-NW株系SYR-Ⅰ型最近,CL03、CL04、FQ02、FQ06、FQ09、FQ11和CL12与pVYNTN-NW株系SYR-Ⅱ型最近.[结论]PVY在福建省长乐市、福清市马铃薯种植区普遍存在,重组株系已成为田间的主流株系,且PVYNTN-NW已成为优势重组株系.