人二硫键氧化还原酶类似蛋白基因启动子克隆和上游抑制元件分析

• 作者: 张菁 徐宜兰 方启晨 白宁宁 贾伟平 陈淑芹
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 二硫键氧化还原酶类似蛋白 转录调控 启动子
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 76-81
• 页数: 6页
• 分类号: R5
• 字数: 3338字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2016.09.020

摘要

目的 克隆DsbA-L基因启动子,并对其活性进行初步分析.方法 以人基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增DsbA-L基因5 '端2115bp片段(从翻译起始点ATG上游-2128 ～-14区域).将PCR产物插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic.随后,构建5'端系列缺失的报告基因质粒.将构建的一系列质粒转染3T3-L1和HEK 293细胞,检测荧光素酶活性.利用在线软件MAPPER预测转录调控关键序列潜在的转录因子结合位点.通过Real-time PCR比较这些转录因子在肥胖和正常人脂肪组织中的表达.结果 成功构建人DsbA-L启动子报告基因质粒.系列缺失分析表明-2128 ～-1302区域是影响转录活性的关键序列.MAPPER软件预测此区域可能与一些转录因子结合.比较这些转录因子在肥胖患者和正常人脂肪组织中的表达情况,发现其中NF-κB和FOXO1在肥胖患者中表达显著增加,进一步推测NF-κB和FOXO1可能是人DsbA-L基因启动子上游的调控抑制因子.结论 成功构建人DsbA-L基因启动子系列缺失质粒,初步分析了其上游可能存在的关键调控元件,为进一步的转录调控研究奠定了基础.