家蚕过敏原细胞视黄酸结合蛋白（CRABP）的克隆表达及生物学分析

• 作者: 刘志刚 刘晓宇 梁志林 王辉 胡维
• 来源期刊: 南昌大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 家蚕 细胞视黄酸结合蛋白 原核表达 变应原性鉴定 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 【基础医学】
• 页码范围: 15-19,23
• 页数: 6页
• 分类号: R593.1|R392.11|Q966
• 字数: 3413字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13764/j.cnki.ncdm.2016.05.005

摘要

目的：研究家蚕细胞视黄酸结合蛋白（CRABP）的原核克隆表达及生物学意义。方法家蚕总 RNA 提取；根据 ref｜NM-001043899｜设计引物；RT-PCR 扩增；PET-28a 质粒目的基因表达载体的构建，转化大肠杆菌 BL21（DE3）；Western bolt 检测重组 CRABP；采用 MEGA5工具包和 clustalw2进行同源性分析；采用 ProtParam Tools预测 CRABP 的理化性质；采用 PSIPRED 和 SWISS-MODEL 预测其蛋白质结构。利用 Preprod、IEDB 和 DNAStar对 CRABP 蛋白 T、B 细胞抗原表位进行预测。结果克隆出家蚕 CRABP 基因开放阅读框399 bp，编码132个氨基酸。CRABP 工程菌（DE3）经 IPTG 诱导高效表达 CRABP 重组的可溶性蛋白，分子量约18 kDa。重组 CRABP能够与家蚕过敏患者血清 IgE 结合。测序证明克隆的家蚕 CRABP 蛋白与黑脉金斑蝶细胞视黄酸结合蛋白（gb｜EHJ79039．1｜）同源性为94％。系统进化树结果显示家蚕与小菜蛾亲缘关系比较近。理化性质预测显示 CRABP蛋白质较稳定。二级结构及三级结构预测结果显示 CRABP 的结构主要以β折叠组成。T 细胞抗原表位预测得到4个肽序列（4-12、20-29、51-59、80-88）。B 细胞抗原表位预测得到4个肽序列（1-16、40-55、67-82、105-120）。结论克隆并表达的家蚕 CRABP 蛋白具有良好的变应原性，为进一步研究家蚕过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志刚	深圳大学过敏反应和免疫学研究所	324	1724	17.0	23.0
2	王辉	深圳大学过敏反应和免疫学研究所	23	393	9.0	19.0
3	刘晓宇	深圳大学过敏反应和免疫学研究所	42	160	7.0	11.0
4	胡维	深圳大学过敏反应和免疫学研究所	5	4	1.0	2.0