应用多重GeXP-PCR同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的研究

• 作者: 曾婷婷 罗思思 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄莉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: GeXP多基因表达分析系统 多重PCR 高通量 鸡免疫抑制病病毒
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1198-1208
• 页数: 11页
• 分类号: S858.315.3
• 字数: 7354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.06.015

摘要

拟建立一种基于GeXP多基因表达分析系统的多重PCR方法,同时检测6种鸡免疫抑制病病毒——鸡马立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亚群)、禽网状内皮组织增生症病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒.多重PCR反应使用嵌合引物和通用引物组合的反应体系,经过GeXP多基因表达分析系统进行毛细管电泳,鉴别PCR产物片段;通过调整嵌合引物浓度、Mg2+浓度、Taq酶浓度优化反应体系及调整退火温度和时间优化反应条件.应用建立的多重GeXP-PCR,分别单独和同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的8个目的基因,同时以其他常见禽类病毒和鸡组织器官核酸为对照,验证其特异性;检测8个目的基因不同浓度的克隆质粒,验证其敏感性;应用建立的多重PCR检测300份临床样品,并同时用荧光定量PCR和测序验证其检测结果的准确性.结果表明建立的多重GeXP-PCR方法能够分别扩增出6种病毒.8个特异性目的片段,不能扩增其他常见禽类病毒和鸡组织器官的基因;在低至100 copies·20μL-1的水平能同时特异性地检测出6种鸡免疫抑制病病毒核酸;检测300份临床病死鸡样品,190份样品显示为阳性,PCR和测序结果与多重GeXP-PCR结果相符.本研究建立的多重GeXP-PCR方法可特异、敏感、高通量地检测6种鸡免疫抑制性病毒,可用于临床鉴别诊断和分子流行病学调查,具有很高的临床应用价值.