9种鸭病毒病GeXP多重PCR检测方法的建立及其应用

• 作者: 张艳芳 曾婷婷 罗思思 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄莉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭病毒病 GeXP检测 多重PCR 特异性嵌合引物
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 2457-2468
• 页数: 12页
• 分类号: S858.325.3
• 字数: 8633字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.12.016

摘要

旨在建立一种能够同时鉴别H5、H7和H9亚型禽流感病毒、基因A型鸭甲肝病毒、鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、新城疫病毒、鸭圆环病毒、番鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒9种常见鸭病毒病的GeXP多重PCR检测方法.根据这些病原体在GenBank上公布的保守基因序列,设计合成了12对特异性GeXP引物.用单一病毒或混合病毒样品的cDNA/DNA模板优化反应条件,同时以其他常见鸭病病原体及鸭组织器官核酸为对照,验证所建立的GeXP方法的特异性和准确性.以10 6至101拷贝·μL-1梯度稀释的克隆质粒或体外转录RNA来检测GeXP方法的敏感性.随机选取不同浓度的模板(103和107拷贝·tL-1)进行干扰性试验,并与单一病原体为模板的GeXP多重PCR的检测结果比较.最后用该方法检测150份临床样品,与普通PCR方法的结果作比较,所有阳性结果样品均进行测序,进一步验证所建立的GeXP检测方法的可靠性.结果显示,单重或多重模板的GeXP检测均能特异性扩增出相应片段,不能扩增其他常见鸭病病原体,并且可在103拷贝·μL-1水平上同时特异地检测出9种鸭病原体.GeXP干扰性试验结果显示,当3种不同浓度的模板组合时,本试验所建立的方法依然可同时检测出所有病原体,与单重检测比较,未影响其检出.比较GeXP多重PCR方法和普通PCR方法对150份临床样品的检测结果,结果显示GeXP方法更为敏感与准确.笔者建立的同时鉴别9种鸭病毒病的GeXP多重PCR检测方法,具有高通量、特异性强和灵敏度高的特点,为混合感染的鸭病毒病临床样品提供了快速分子诊断新方法.