gas6基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定

• 作者: 叶伟 叶传涛 张芳琳 董阳超 边培育 陈何嵩 雷迎峰 韩佩君 马宏炜
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 生长停滞特异性基因6 慢病毒载体 骨髓间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 763-768
• 页数: 6页
• 分类号: Q25|Q78
• 字数: 4566字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.06.003

摘要

目的:制备携带生长停滞特异性基因6(gas6)的慢病毒,并构建和鉴定稳定表达生长停滞特异性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs).方法:采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,用流式细胞术检测MSCs标志分子;根据GenBank中小鼠gas6基因序列设计并合成上下游引物,以MSCs提取的mRNA制备的cDNA为模板扩增gas6基因片段,克隆入慢病毒表达载体,获得Lenti-gas6-GFP-zeocin质粒并测序鉴定;采用三质粒包装系统(穿梭质粒pLenti-gas6-GZ、包装质粒pSPAX2和pMD2.G)包装慢病毒,并验证其表达目的基因情况;将浓缩的慢病毒离心感染第4代MSCs,用吉欧霉素(zeocin)筛选培养后获得稳定表达GAS6的MSCs,采用流式细胞术检测其阳性率以及表面标志分子表达情况.结果:构建了携带gas6基因的慢病毒,建立了gas6基因修饰的MSCs.结论:慢病毒载体可介导gas6基因在小鼠MSCs中过表达,且不会干扰MSCs的生物特性,为进一步研究gas6基因修饰的MSCs的治疗作用奠定了实验基础.