人类微小RNA-1246慢病毒抑制载体的构建及对宫颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响

• 作者: 卢艳 姚德生 杜萍 赖月华
• 来源期刊: 广西医学
• 学科: 医学
• 关键词: 宫颈癌 慢病毒 微小RNA 抑制载体 增殖 侵袭
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 1053-1057
• 页数: 5页
• 分类号: R737.33
• 字数: 4623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11675/j.issn.0253-4304.2016.08.01

摘要

目的 构建并鉴定微小RNA(miRNA)-1246慢病毒抑制载体,并探讨miRNA-1246下调对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响.方法 针对miRNA-1246成熟体的反义核苷酸片段设计引物并合成目的基因miRNA-1246-down,应用基因重组技术将目的基因克隆到空载质粒GV280中,通过酶切、PCR、DNA测序验证重组慢病毒质粒(GV280-miRNA-1246-down)的构建是否成功,将GV280-miRNA-1246-down、Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞获得重组慢病毒,浓缩提纯病毒液并检测病毒滴度,再用重组病毒液感染宫颈鳞癌细胞SiHa,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)验证GV280-miRNA-1246-down在SiHa细胞的表达情况,用嘌呤霉素筛选GV280-miRNA-1246-down稳转细胞株.将SiHa细胞分为空白组(NC组)、阴性病毒组(NC-LV组)、miRNA-1246下调组(miRNA-1246-down-LV组),用细胞计数的方法检测细胞的生长率,用Transwell检测细胞侵袭能力.结果 (1)对菌落进行PCR鉴定筛选构建正确的慢病毒载体,DNA测序证实插入的基因序列正确.(2)慢病毒将目的基因miRNA-1246-down成功导入SiHa细胞中,同时达到稳定表达,转染率达90％以上,在荧光显微镜下能直接观察到GFP.(3) miRNA-1246-down-LV组SiHa细胞增殖数低于其他两组(P＜0.05),细胞穿膜次数较其他两组减少(P＜0.05).结论 miRNA-1246慢病毒抑制载体构建成功,miRNA-1246稳定下调的SiHa细胞株建立成功.在SiHa细胞中miRNA-1246下调可抑制宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖以及侵袭能力.