人类microRNA-1246慢病毒抑制载体的构建以及鉴定

• 作者: 卢艳 姚德生 杜萍 赖月华
• 来源期刊: 医学信息
• 关键词: 慢病毒载体 microRNA 抑制载体 宫颈癌 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2016,（29）
• 所属期刊栏目: 荫临床医学 -- 论著
• 页码范围: 93-95
• 页数: 3页
• 字数: 3766字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建microRNA-1246慢病毒抑制载。方法针对microRNA-1246成熟体的反义核苷酸片段,应用基因重组技术将目的基因片段克隆到GV280慢病毒载体中，通过酶切、PCR、DNA测序验证重组克隆的成功构建，将GV280-mir-1246down、Helper1.0、Helper2.0共转染293T细胞获得重组慢病毒，浓缩提纯病毒液并检测病毒滴度，用病毒液感染siha细胞，通过检测绿色荧光蛋白(GFP)验证GV280-mir-1246down在siha细胞的表达情况，用嘌呤霉素筛选GV280-mir-1246down稳转细胞株。用细胞计数的方法检测细胞的生长率。结果①对菌落进行PCR鉴定筛选出构建正确的慢病毒载体,DNA测序证实插入的基因序列正确；②GV280-mir-1246down、Helper1.0、Helper2.0共转染293T细胞产生重组慢病毒；③目的mir-246down被慢病毒成功导入siha细胞中，同时达到稳定表达，转到率几乎达100%，荧光显微镜下能直接观察到GFP；④细胞计数结果显示在siha细胞中microRNA-1246的下调细胞的生长速度减弱。结论成功构建microRNA-1246慢病毒抑制载体,建立siha细胞mir-1246-down的稳转株，microRNA-1246在siha细胞中下调的siha细胞的增殖能力下降.这为研究microRNA-1246在宫颈鳞癌siha细胞的作用及其机制提供了可靠的基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚德生	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	90	398	11.0	15.0
2	卢艳	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	20	108	6.0	9.0
3	杜萍	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	5	23	2.0	4.0
4	赖月华	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	2	5	1.0	2.0