构建P16慢病毒载体永生化心肌干细胞的探讨

• 作者: 廖翔 张琳 张西峰 蒋续钢
• 来源期刊: 中西医结合心脑血管病杂志
• 关键词: P1 6 慢病毒 衰老 心肌细胞 增殖抑制 传代稀释效应
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学论著/研究
• 页码范围: 864-865
• 页数: 2页
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.16721349.2014.07.044

摘要

目的：构建P16慢病毒载体，为修复坏死心肌干细胞提供理论基础。方法构建 pLVX p16ink4a ZsGreen、pLVX P16INK4a慢病毒载体，将P16目的基因转导入目标细胞。利用倒置免疫荧光显微镜观察携带绿色荧光蛋白的 pLVX p16ink4a ZsGreen阳性转导细胞的变化，并通过β半乳糖苷酶染色鉴定观察 pLVX P16INK4a 转导阳性细胞即衰老细胞的变化。利用Western blotting法测定P16目的基因转导成功后蛋白变化水平。结果携带绿色荧光蛋白的 pLVX P16ink4a ZsGreen阳性转导细胞传代增殖受到抑制，β半乳糖苷酶染色鉴定观察 pLVX P16INK4a转导阳性细胞即衰老细胞增殖受到抑制，上述两种阳性转导细胞在细胞培养传代过程中被稀释。Western blotting法测定p16INK4a蛋白水平也存在稀释变化。结论构建P16慢病毒载体转导目标细胞传代培养过程中，目的基因P16在细胞传代增殖过程中存在抑制作用，并可导致转导阳性细胞稀释。