microRNA-223过表达与抑制表达慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 吉宁 周敏 江潞 王韵 陈谦明
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: microRNA-223 慢病毒 过表达载体 抑制表达载体
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 451-455
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4444字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7518/hxkq.2015.05.002

摘要

目的 构建microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体,并验证其过表达或抑制表达microRNA-223的效率.方法 设计针对microRNA-223前体的过表达基因片段及针对microRNA-223成熟体的反义片段,应用聚合酶链反应(PCR)调取目的基因及通过退火反应获得双链DNA寡聚核苷酸片段.并通过基因重组技术将目的基因片段及反义片段分别克隆到GV229及GV232慢病毒载体中,进行PCR鉴定及DNA测序比对分析,构建相应的microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体.利用荧光定量PCR法检测microRNA-223表达水平.结果 对阳性克隆进行PCR鉴定及DNA测序证明,microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体构建成功.microRNA-223过表达慢病毒载体能显著提高细胞中microRNA-223表达水平,microRNA-223抑制表达慢病毒载体能明显抑制细胞中microRNA-223表达水平.结论 成功构建microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体,为进一步研究microRNA-223对口腔癌发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体.