ALEX1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 邓小芳 雷继魁 高月
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: ALEX1 慢病毒 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 678-681
• 页数: 4页
• 分类号: R329.26|R329.28
• 字数: 3150字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.05.017

摘要

目的:探讨构建Arm重复蛋白1(ALEX1)基因过表达慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞系SK-BR3后观察ALEXI的表达,为研究ALEX1在乳腺癌中的作用及机制奠定基础.方法:利用DNA重组技术将ALEX1基因插入到慢病毒穿梭质粒LV5中,获得重组慢病毒质粒V-ALEX1,经酶切鉴定及DNA测序鉴定后,用Lipofectamine 2000将重组质粒和慢病毒包装质粒系统(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)转染293T细胞中包装成重组慢病毒颗粒,经流式细胞术测定重组慢病毒滴度.将成功包装的ALEX1过表达慢病毒载体(LV5-ALEX1)和阴性对照载体(LV5-NC),感染SK-BR3细胞(MOI为10)48～72 h,Realtime PCR和Western blot法分析ALEX1表达情况.结果:酶切鉴定结果显示:产生约1 500 bp的片段,片段大小与ALEX1基因cDNA大小一致.DNA测序比对说明测序结果与预期ALEX1基因序列完全一致,证实ALEX1基因正确插入载体中,成功构建ALEX1基因过表达载体.经293T细胞包装后,成功获得病毒滴度为4.25x108 TU/ml的重组慢病毒LV5-ALEX1.Realtime PCR和western blot结果显示:与感染LV5-NC的SK-BR3细胞相比,LV5-ALEX1感染可明显增加ALEX1 mRNA及蛋白的表达水平.结论:成功构建ALEX1基因过表达慢病毒载体,ALEX1基因过表达慢病毒能够感染乳腺癌SK-BR3细胞,可使外源基因获得稳定过表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓小芳	重庆市北碚区中医院检验科	12	34	3.0	5.0
2	高月	重庆市北碚区中医院检验科	11	20	2.0	4.0
3	雷继魁	重庆市北碚区中医院检验科	4	5	2.0	2.0