小鼠Sema3A基因过表达慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 卢利 张扬 朱玉 王健 金婕 阎秀林 陈钰文
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Sema3A 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 226-229,233
• 页数: 5页
• 分类号: R783.5
• 字数: 2908字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建小鼠Sema3A基因过表达慢病毒载体。方法通过体外合成小鼠全长Sema3A cDNA，采用Gateway技术将其基因插入到pDown?mSema3A?IRES/EGFP质粒中，再交换重组获得重组质粒pLV/EXPNZ?puro?mSema3A?IRES/EGFP，经过测序鉴定后，包装与浓缩慢病毒载体pLV（Exp）?Puro?CMV?mSema3A?IRES/EGFP，最后重组慢病毒载体转染293T细胞获得病毒液。结果重组慢病毒载体11538 bp，测序结果证实Sema3A基因共2319 bp正确插入带有EGFP的载体中，成功构建小鼠Sema3A基因过表达载体。结论成功构建小鼠慢病毒载体pLV（Exp）?Puro?CMV?mSema3A?IRES/EGFP，为该基因在特定细胞内过表达株的筛选奠定基础。