CASK基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 刘俊 周华富 孙宇 王延宁 覃觅 赵文
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: CASK 慢病毒 载体构建 过表达
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 684-687
• 页数: 4页
• 分类号: R349.8
• 字数: 2879字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2017.05.011

摘要

目的:构建人钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(CASK)基因过表达慢病毒载体并进行鉴定.方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增CASK基因片段,通过连接酶将CASK基因片段连接至线性化的GV358载体上,运用PCR方法鉴定阳性克隆的CASK GV358载体;将重组质粒和包装质粒共转染至293T细胞,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行滴度检测.将成功包装的CASK过表达慢病毒LV-CASK(OE组)和阴性对照病毒CON238(NC组)分别感染人非小细胞肺癌(NSCLC)H1299细胞,同时设空白对照组(MOCK组),用荧光定量PCR(FQ-PCR)和western blotting法检测CASK表达水平.结果:通过PCR技术成功地扩增CASK基因片段并连接到GV358病毒载体上,PCR及DNA测序鉴定结果证明CASK-GV358质粒构建正确;重组慢病毒转染293T细胞后可观察到绿色荧光及蛋白表达,包装过表达慢病毒并测定其浓缩滴度为2×108TU/mL.FQ-PCR和western blotting检测结果显示,与NC组相比,OE组CASK mRNA和蛋白的表达均显著上调(P＜0.05).结论:成功构建CASK基因过表达慢病毒载体,可在H1299细胞中稳定表达,为CASK基因的后期研究提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周华富		111	265	7.0	8.0
2	刘俊		14	29	3.0	4.0
3	孙宇		24	67	5.0	6.0
4	赵文		14	23	3.0	4.0
5	王延宁		3	7	2.0	2.0
6	覃觅		1	2	1.0	1.0