miR-186过表达慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 李友 李胜男 王梦旭 胡伟东 陈少凤 陈杏兰
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: miR-186 慢病毒 HEK293T细胞 过表达慢病毒载体 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 997-1002,封2
• 页数: 7页
• 分类号: R346
• 字数: 4590字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20190504

摘要

目的:构建miR-186过表达慢病毒载体并包装慢病毒,探讨miR-186在人胚胎肾细胞(HEK)293T细胞系中的感染效率和表达水平.方法:以Hsa-miR-186前体序列为模板,设计并合成引物,PCR法扩增pre-miR-186基因序列,并将其克隆到携带EGFP/Puromycin的慢病毒载体FV040中,经EcoRⅠ和A geⅠ酶切及测序鉴定后获得重组慢病毒载体.利用Lipofectamine 2000将重组慢病毒质粒FV040 Vector和FV040 miR-186分别与辅助质粒通过共转染至HEK293T细胞中,48 h后收集慢病毒,以FV040 Vector慢病毒作为对照组,FV040 miR-186作为实验组,分别感染HEK293T细胞.感染48 h后,观察HEK293T细胞中绿色荧光的分布情况,并采用实时荧光定量PCR法检测miR-186的表达水平.结果:测序分析,miR-186过表达慢病毒与GenBank上公布的miR-186序列完全一致.与对照组(0.8387±0.1456)比较,实验组HEK 293T细胞中miR-186表达水平(12.6400±0.7884)明显升高(t=14.72,P<0.01),约为对照组的15.07倍.结论:成功构建miR-186过表达慢病毒载体并包装出慢病毒 , miR-186慢病毒成功感染 HEK293T细胞 , miR-186表达水平在HEK293T细胞中明显升高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李胜男		3	2	1.0	1.0
2	王梦旭	广东医科大学附属医院神经病学研究所	2	2	1.0	1.0
3	胡伟东	广东医科大学附属医院神经病学研究所	4	4	2.0	2.0
4	陈少凤	广东医科大学附属医院神经病学研究所	3	2	1.0	1.0
5	陈杏兰	广东医科大学附属医院神经病学研究所	2	2	1.0	1.0
6	李友		4	2	1.0	1.0