hsa-miR-381过表达慢病毒载体的构建、转染和表达

• 作者: 叶文广 周苏娜 崔耀友 张明鑫 梁军
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: miR-381 慢病毒载体 食管鳞癌 基因转染
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 241-245
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3878字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2017.03.009

摘要

目的 构建hsa-miR-381过表达慢病毒载体病毒载体,并对其在食管鳞癌TE10细胞中miR-381表达调节效果进行鉴定. 方法 利用PCR法扩增miR-381基因序列,将目的基因miR-381克隆到携带Green&Puro的慢病毒载体LV3中,经双酶切及测序鉴定后大量抽提;利用脂质体将含目的基因的重组质粒和包装质粒pGag/Pol、pRev、pVSV-G共转染293T细胞;用得到的慢病毒转染TE10细胞,通过荧光显微镜观察转染状况,实时荧光定量PCR分析转染前后miR-381的表达. 结果 酶切与测序结果证明成功构建重组质粒,并成功包装成慢病毒,实验组病毒滴度为2×108 TU/ml,空白阴性对照组病毒滴度为2×108 TU/ml.TE10细胞转染过表达慢病毒后miR-381的表达升高,TE10-381组has-miR-381的表达丰度是TE10组的456.05倍. 结论 LV3-hsa-miR-381慢病毒载体构建成功,并能明显增加TE10细胞中miR-381的表达量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周苏娜	第四军医大学唐都医院放疗科	9	19	3.0	4.0
5	叶文广	第四军医大学肿瘤研究所	10	38	3.0	6.0
6	崔耀友	第四军医大学唐都医院放疗科	2	1	1.0	1.0
7	梁军	第四军医大学唐都医院放疗科	103	444	10.0	15.0
8	张明鑫	第四军医大学肿瘤研究所	38	128	6.0	9.0