hsa-miR-150-5p抑制序列慢病毒载体的构建、转染和表达

• 作者: 叶文广 周苏娜 张明鑫 王景杰
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: miR-150 慢病毒载体 炎症性结肠病
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R735.35
• 字数: 2928字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2018.01.002

摘要

目的 构建携带抑制表达hsa-miR-150-5p的慢病毒载体,建立稳定表达该载体的HT-29细胞. 方法 设计并合成hsa-miR-1506p抑制序列,并克隆到工具载体GV-280(hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)构建重组载体,将重组载体与pHelper1.0载体和pHelper2.0载体共转染293T细胞,得到所需的病毒液LV-hsa-miR-1 50-5p-down,最后感染HT-29细胞,并通过嘌呤霉素筛选出稳定感染的细胞株.荧光显微镜观察HT-29细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,RT-PCR检测hsa-miR-150-5p在HT-29细胞中的表达水平. 结果 测序结果证明成功构建重组质粒,并成功包装成慢病毒,实验组(转染过表达LV-hsa-miR-150-5p-down病毒)病毒滴度为5×10s TU/ml,阴性对照组(转染阴性LV-NC病毒)病毒滴度为8×10s TU/ml.所得病毒液感染HT-29细胞并筛选出稳定细胞株HT29-150-5p-down.荧光显微镜观察带有绿色荧光蛋白的目的重组质粒在人结肠癌HT-29细胞中高表达,PCR进一步验证了这一结果. 结论 LV-hsa-miR-150-5 p-down慢病毒载体构建成功,HT-29细胞稳定表达该载体,为后续miR-150的功能研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王景杰	第四军医大学唐都医院消化内科	217	1896	21.0	31.0
2	周苏娜	第四军医大学唐都医院放疗科	9	19	3.0	4.0
3	叶文广	第四军医大学唐都医院消化内科	10	38	3.0	6.0
4	张明鑫	第四军医大学唐都医院消化内科	38	128	6.0	9.0