人miR-100-3p抑制序列慢病毒载体及其稳定表达的小鼠胚胎成纤维细胞的建立

• 作者: 任海风 倪芳 朱其苹 汪思应 董伟 邓瑞晴 郭强
• 来源期刊: 中国临床药理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞 肿瘤
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 研究方法
• 页码范围: 925-928
• 页数: 4页
• 分类号: R968
• 字数: 2694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2017.10.016

摘要

目的 构建携带针对人miR-100-3p抑制序列的慢病毒载体,建立稳定表达的该载体的小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞.方法 设计并合成特定的miR-100-3p抑制序列克隆入载体hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin构建重组载体,将该载体与pHelperl.0载体和pHelper2.0载体三质粒共感染293T细胞得到所需的病毒液,最后感染MEF细胞,并通过嘌呤霉素筛选出稳定感染的细胞株.检测MEF细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达和hsa-miR-100-3p在MEF细胞中的表达水平,验证慢病毒在MEF细胞中的抑制表达效果.结果 测序结果证明成功构建了重组质粒,并成功的包装成慢病毒,所得病毒液感染MEF细胞并筛选出稳定细胞株.流式分析提示,带有绿色荧光蛋白的目的重组质粒在小鼠胚胎成纤维细胞细胞中的表达(显著抑制miR-100表达)达到了97.4％和95.1％,PCR进一步验证这一结果.结论 hsa-肘识-100-3p抑制序列慢病毒沉默载体及抑制miR-100-3p表达的MEF细胞可被成功构建,为后续miR-100的功熊研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪思应	安徽医科大学基础医学院	131	558	11.0	15.0
2	倪芳	安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室	16	66	5.0	7.0
3	任海风	安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室	4	2	1.0	1.0
4	朱其苹	安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室	3	6	2.0	2.0
5	郭强	安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室	2	4	1.0	2.0
6	邓瑞晴	安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室	1	1	1.0	1.0
7	董伟	安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室	2	3	1.0	1.0