丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核表达质粒的构建及其对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 李婷 温丽敏 王海龙 王玉晶 白欣艳 解军 贾三三 郭睿
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2 HeLa细胞 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 463-468
• 分类号: Q255|Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因真核表达质粒,建立稳定过表达SRPK2的HeLa细胞系,并探讨SRPK2过表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法 利用RT-PCR从小鼠睾丸组织中扩增SRPK2基因,与p3×Flag-CMV-14质粒连接,构建重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-SRPK2,转染HeLa细胞,通过G418筛选获得稳定转染细胞系.采用RT-PCR检测稳定转染HeLa细胞系中SRPK2基因的转录,Western blot检测SRPK2的表达;MTT法和流式细胞术分别检测SRPK2过表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响.结果 菌落PCR、双酶切及DNA测序表明重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-SRPK2构建正确;RT-PCR和Western blot分析表明SRPK2基因在HeLa细胞中稳定过表达;p3×Flag-CMV-14-SRPK2稳定转染组细胞增殖活力明显高于p3×Flag-CMV-14转染组和未转染组(JP＜0.05),细胞凋亡率明显低于上述两组(P＜0.05).结论 成功构建了SRPK2基因的真核表达质粒,建立了稳定过表达SRPK2的HeLa细胞系,SRPK2过表达可增强HeLa细胞的增殖活力,而抑制其凋亡.