来源于芽孢杆菌HJ14耐热酯酶的克隆表达、酶学性质及降解邻苯二甲酸二乙酯研究

• 作者: 丁俊美 彭政 慕跃林 李俊俊 杨云娟 黄遵锡
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 耐热酯酶 异源表达 酶学性质 DEP降解
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1932-1943
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20160173

摘要

[目的]克隆芽孢杆菌HJ14的酯酶基因EstZ1并利用大肠杆菌表达得到相应的酯酶,分析重组酯酶的酶学性质和对邻苯二甲酸二乙酯(Diethyl phthalate,DEP)的降解.[方法]特异性扩增酯酶基因EstZ1并对其全长测序,分析其氨基酸序列.利用pEASY-E2表达系统将EstZ1转化到Escherichia coli BL21(DE3)中完成异源表达.根据组氨酸标签纯化EstZ1,研究其酶学性质并利用HPLC和LC/MS检测系统定性分析其对DEP的降解.[结果]EstZ1全长903 bp,编码300个氨基酸残基,蛋白分子量33.84 kDa.EstZ1氨基酸序列分析结果显示,与NCBI数据库收录的HSL-like家族酯酶相似度最高可达到98％.酶学性质分析结果显示,EstZl可水解碳链长度较短的p-NP底物,最适底物为p-NPC4 (p-NP butyrate).EstZl的最适pH和最适温度分别为9.0和50℃,并且在pH 7.0-9.5和40-70℃范围内保持50％以上的酶活,为耐热碱性酯酶.EstZ1对多数金属离子和化学试剂保有良好的抗性.EstZ1可将DEP水解生成相应的单酯和醇.[结论]本文报道了Bacillus sp.HJ 14来源的酯酶基因并对其在大肠杆菌中表达获得的重组酶的酶学性质进行研究,EstZ1具有良好的碱性pH耐受性和热稳定性,能够部分降解DEP,本研究对邻苯二甲酸酯类的生物降解有一定的参考意义.