摘要:
目的 探讨2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)诱导人脐静脉血管内皮细胞发生凋亡与自噬及两者之间的关系.方法 传代培养人脐静脉血管内皮细胞,在常氧实验条件下,细胞被分为对照组,不同浓度的2-DG组、2-DG联合甘露糖组、阳性对照组(衣霉素组),利用MTS比色法检测2-DG对人脐静脉血管内皮细胞增殖活性的影响;利用Western blot免疫印记技术,检测细胞内质网应激相关蛋白-葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达水平,以反映处理后的细胞内质网应激的水平变化;以Annexin V-PI流式细胞术检测人脐静脉血管内皮细胞凋亡.为了检测2-DG对细胞自噬的影响,引入自噬抑制剂3-MA,采用Western blot免疫印记技术,检测自噬相关蛋白Beclin 1和Atg5的表达水平,以反映处理后的细胞自噬水平变化.结果 2-DG组细胞增殖活力明显降低,与对照组相比具有统计学意义,且该抑制作用呈剂量依赖性;2-DG联合甘露糖组增殖活力有所增加,与单独2-DG组相比具有统计学意义;2-DG组凋亡率明显增加,与对照组相比具有统计学意义,2-DG联合甘露糖组细胞凋亡减少,与单独2-DG组相比具有统计学意义;2-DG组GRP78蛋白水平增加,与对照组相比具有统计学意义;加入甘露糖后,GRP78蛋白水平减少,与单独2-DG组相比具有统计学意义;2-DG组Bec-lin1和Atg5蛋白表达均有所增加,与对照组相比具有统计学意义;3-MA预处理细胞抑制自噬后,2-DG诱导的细胞凋亡增多,Beclin1和Atg5蛋白表达也有所减少,与2-DG组相比具有统计学意义.结论 2-DG显著抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖,诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡及自噬;内质网应激可能是介导2-DG诱导细胞凋亡的相关作用机制;2-DG诱导的细胞自噬则能抑制细胞凋亡.