牦牛肠道病毒间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

• 作者: 何欢 刘燕 叶勇刚 张斌 汤承 王斌星 覃思楠 陈新诺
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 肠道病毒 间接免疫荧光检测方法
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 2450-2456
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 5591字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.12.015

摘要

为了建立准确、快速的牦牛肠道病毒(yak enterovirus)检测方法,利用本实验室已获得的一株牦牛肠道病毒SWUN-AB001,免疫健康兔获得抗SWUN-AB001高免血清,建立了一种检测牦牛肠道病毒的间接免疫荧光试验(IFA)方法,并对其工作条件和时间进行筛选,优化出最佳条件.采用该方法对40份临床腹泻样本进行了牦牛肠道病毒的检测,并与RT-PCR的检测结果进行比较.结果表明:获得的高免血清在该IFA方法中的最佳稀释度为1∶100,工作时间为30 min;FITC标记的羊抗兔IgG(二抗)的稀释度为1∶800,工作时间为45 min,牦牛肠道病毒特异性亮绿色荧光颗粒清晰可见;同时与牛病毒性腹泻病毒、轮状病毒、大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌和空肠弯曲杆菌反应均未见明显的荧光颗粒;该方法能够检测SWUN-AB001病毒的最低浓度约为20 TCID50·mL-1;该方法的临床检测结果与RT-PCR的检测结果之间无差异(P=0.329).结果表明该方法特异性强、重复性好、灵敏度高,为该病毒在牦牛养殖地区的流行病学调查、临床诊断和快速诊断试剂的开发奠定了基础.