大鼠 NKx6.1启动子克隆及特异性表达分析

• 作者: 姚远 张欣 张瑞 汪蓓蕾 王大玮 郭刚 陈皓
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 同源盒基因 NKx6.1 甲状腺激素 双荧光素酶报告检测 启动子活性
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 113-116
• 页数: 4页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.08.017

摘要

旨在构建大鼠 NKx6.1启动子的报告载体，验证转录因子 T3R 对 NKx6.1启动子的调控活性。用 PCR 扩增大鼠脑组织 NKx6.1的5'上游启动子片段2.4 kb，应用生物信息学方法预测该片段上潜在的转录因子 T3R 结合位点，根据不同的结合位点作系列截短，获得3段长度不等的启动子缺失片段，分别克隆到荧光素酶报告基因表达质粒（pGL3-Basic）上，构建相应的报告载体。将报告载体和 T3R 共转染大鼠星形胶质细胞（rat astrocytes，RA），并检测报告基因荧光素酶的活性。结果显示，成功构建大鼠 NKx6.1启动子报告载体，双荧光素酶报告基因活性检测表明 T3R 对 NKx6.1启动子有明显调控作用，其中-1887 bp-1507 bp 活性最高，即存在关键顺式调控元件。克隆并筛选出启动子核心区域，揭示了甲状腺激素对大鼠 NKx6.1的表达调控机制。