Caco-2建立肠黏膜屏障模型及其在通透性研究中的应用

• 作者: 孙梅 张雪娇 林楠 王洋 许玲芬 郭静
• 来源期刊: 国际儿科学杂志
• 关键词: 人结肠癌细胞系 通透性 跨上皮电阻 血小板活化因子 ZO-1蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 239-243
• 页数: 5页
• 字数: 4949字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4408.2016.03.019

摘要

目的：利用 Caco-2细胞建立体外肠黏膜屏障模型,系统评价并初步探讨其在炎症损伤后黏膜通透性改变中的应用。方法体外培养 Caco-2细胞,接种于 Transwell 板上,每日观察细胞形态；自培养第5天起,隔日测细胞膜的跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)；对于 TEER 值达标准的孔测定荧光黄透过率,进行透射电镜的完整性验证。应用培养21 d 的 Caco-2细胞屏障,加入不同浓度(0、50、100、200 nmol /L)的血小板活化因子(platelet-activating factor,PAF)孵育24 h,光镜、电镜观察形态学改变,检测 TEER 和荧光黄透过率,应用间接免疫荧光和 Western blot 观察 ZO-1蛋白的分布及表达。结果Caco-2细胞单层 TEER 从第5～15天逐渐增加,在第15天已经达到600Ω?cm2,平台期保持至第21天；在此期间,细胞形成紧密单层,电镜下细胞呈高分化,细胞间形成紧密连接,绒毛整齐,极性形成；荧光黄透过量极低,体外肠上皮细胞屏障形成。加入 PAF 后,以100 nmol /L 对黏膜屏障通透性影响最大：电镜下见紧密连接结构破坏、断裂,细胞表面微绒毛脱落、稀疏；免疫荧光可见紧密连接的标志蛋白 ZO-1荧光信号减弱,ZO-1环断裂,胞浆内可见阳性染色,提示其向膜下转移。此时,TEER 值下降,荧光黄透过量明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P ＜0.01),与形态学改变规律一致；ZO-1蛋白表达亦降至最低,与对照组相比差异有统计学意义(P ＜0.01)。结论经形态学及细胞通透性验证,培养2～3周的 Caco-2细胞可形成肠屏障模型,用于体外肠黏膜屏障的研究；PAF 影响紧密连接相关蛋白的表达,破坏紧密连接结构,从而影响肠黏膜屏障通透性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王洋	中国医科大学附属盛京医院儿科	36	132	6.0	10.0
2	林楠	中国医科大学附属盛京医院儿科	20	97	5.0	9.0
3	许玲芬	中国医科大学附属盛京医院儿科	38	219	8.0	13.0
4	孙梅	中国医科大学附属盛京医院儿科	158	1028	17.0	22.0
5	张雪娇		17	157	6.0	12.0
6	郭静	中国医科大学附属盛京医院儿科	33	193	8.0	11.0