补肾方含药血清干预大鼠椎间盘软骨细胞miRNA的差异表达

• 作者: 付强强 周文锐 嵇承栋 曾思良 朱敏洁 李琛 梁兴伦 潘欣 许畅
• 来源期刊: 上海中医药杂志
• 关键词: 补肾方 软骨细胞 大鼠miRNA芯片 差异表达
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 65-69
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16305/j.1007-1334.2016.01.022

摘要

目的 筛选补肾方含药血清干预大鼠椎间盘软骨细胞后差异表达的miRNA,为补肾方治疗颈椎病提供可供选择的目标miRNA,以探讨其通过调控靶基因表达发挥治疗效应的机制.方法 原代培养的大鼠椎间盘软骨细胞经Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色和甲苯胺蓝染色鉴定后,分别用补肾方含药血清、空白血清干预椎间盘软骨细胞,在绘定时间点收获细胞,抽提纯化总RNA,行miRNA芯片检测,通过芯片差异性分析,挑选差异表达4倍以上的miRNA行定量聚合酶链式反应(PCR)验证.结果 二次酶消化法可简便高效培养大量原代椎间盘软骨细胞,所培养细胞具有典型的椎间盘软骨细胞形态和功能,Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色和甲苯胺蓝染色均为阳性.补肾方含药血清干预组芯片数据分别与相应时间点的空白血清组芯片数据行组间比较后再行组内比较,与含药血清干预椎间盘软骨细胞1d相比,干预3d的共有121个2倍以上表达差异的miRNA,其中上调的53个,下调的68个.差异表达4倍以上的miRNA定量PCR结果与芯片数据一致.结论 补肾方含药血清干预椎间盘软骨细胞获得了一套较为特异的miRNA,初步预测上调的miRNA可能通过靶向Opn、Col、Bcl212、Vdr、IGF-I、Mmp-13等基因在椎间盘营养代谢相关信号通路中发挥作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘欣		3	3	1.0	1.0
2	梁兴伦		22	96	5.0	8.0
3	嵇承栋		29	81	6.0	8.0
4	付强强		20	50	5.0	6.0
5	许畅		16	29	3.0	5.0
6	曾思良		2	0	0.0	0.0
7	周文锐		9	58	4.0	7.0
8	李琛		12	58	4.0	7.0
9	朱敏洁		8	60	3.0	7.0