沉香DNA提取方法及种质资源聚类分析研究

• 作者: 吴文如 张桂芳 赖小平 钟志敏 黄松
• 来源期刊: 世界科学技术-中医药现代化
• 学科: 医学
• 关键词: CTAB法 试剂盒法 DNA条形码 ITS2 聚类分析
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 思路与方法
• 页码范围: 1631-1639
• 页数: 9页
• 分类号: R282.2
• 字数: 5902字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11842/wst.2016.10.003

摘要

目的:分别建立适用于提取不同类型沉香样品(叶片、干燥枝条、药材)DNA的方法,通过ITS2序列对沉香药材进行种质资源聚类分析.方法:根据沉香叶片、干燥枝条、药材的组织差异,分别采用试剂盒法和优化的CTAB法提取DNA;利用紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增及ITS2序列测定来检测DNA的纯度、浓度及可用性,以比较不同DNA提取方法的效率;将样品测序结果与从GenBank下载的沉香属(Aquilaria spp.)、拟沉香属(Gyrinops spp.),及沉香药材常见混伪品的ITS2序列,进行聚类分析.结果:优化的CTAB法提取得到的DNA纯度比试剂盒法稍低,但浓度更高.两种方法所提沉香总DNA进行ITS2序列的PCR扩增成功率和测序成功率均为100％.ITS2序列能准确鉴别出4个沉香混伪品和2个拟沉香物种,且15个沉香样品ITS2序列与Aquilaria subintegra(泰国)、Aquilaria sinensis(中国)、Aquilaria crassna(柬埔寨、泰国)三个沉香物种均100％相似.结论:本研究中的两种DNA提取方法均可用于沉香DNA条形码研究;优化CTAB法比试剂盒法更适用于药材DNA的提取,该方法为有关中药材DNA的提取提供了参考;ITS2序列可为沉香种质资源的鉴定和系统发育分析提供必要的实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赖小平	广州中医药大学中药学院	353	3650	27.0	44.0
2	吴文如	广州中医药大学中药学院	33	201	8.0	13.0
3	钟志敏	广州中医药大学中药学院	4	14	2.0	3.0
4	张桂芳	广州中医药大学中药学院	34	221	9.0	12.0
5	黄松	东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院	18	134	8.0	10.0