C-GPC3蛋白的表达及人源GPC3抗体的筛选

• 作者: 付洁 刘玉杰 刘蕴慧 宋海峰 张晶 王芳 高新
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 C-末端 293E细胞 哺乳动物展示型抗体库 scFv 流式细胞术 分选
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 13-17,22
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建C-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)基因真核表达质粒,表达C-GPC3蛋白,并通过哺乳动物展示型全人源scFv抗体库筛选GPC3抗体.方法 通过PCR从含有全长GPC3的质粒中扩增C-GPC3基因,将其克隆至p3457-his载体中,构建重组真核表达质粒p3457-C-GPC3,转染293T细胞,对C-GPC3蛋白的表达进行Westem blot鉴定.将质粒p3457-C-GPC3瞬时转染293E细胞,获得C-GPC3蛋白,采用Ni亲和柱纯化后,进行FITC标记.以本课题组构建的哺乳动物展示型全人源scFv抗体库为起始文库,FITC-C-GPC3抗原按照10、2和0.8 nmol/L的浓度梯度,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例约为0.1％的阳性细胞.结果 重组表达质粒p3457-C-GPC3经菌液PCR和测序鉴定证明构建正确;瞬时转染293T和293E细胞均可表达相对分子质量约为25 000的C-GPC3蛋白;获得了可与C-GPC3结合的阳性率约为0.1％的阳性细胞.结论 成功构建了重组真核表达质粒p3457-C-GPC3,并从哺乳动物展示型全人源scFv抗体库中筛选出了阳性细胞,为后期全人源GPC3抗体的构建和表达奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王芳	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	27	162	5.0	12.0
2	高新	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	25	142	7.0	10.0
3	付洁	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	17	39	3.0	5.0
4	张晶	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	11	67	5.0	8.0
5	刘蕴慧	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	4	5	2.0	2.0
6	刘玉杰		1	0	0.0	0.0