miR-155体外特异性靶向鸡内源性反转录病毒ALVE1 env转录物的研究

• 作者: 刘洋洋 孙振 宋成义 崔恒宓 朱文奇 耿拓宇 胡序明 陈世豪 高波
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: miR-155 靶位点 鸡内源性反转录病毒 ALVE1 env
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2297字
• 语种: 中文

摘要

通过生物信息学方法,发现了鸡内源性反转录病毒禽白血病E1 (ALVE1)的env转录物存在gga-miR-155作用位点(AGCATTA),并在体外验证其靶位点的活性.将鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组中扩增的ALVE1 env转录物构建至荧光素酶报告载体pmirGLO,获得重组质粒pmir-GLO-ALVE1-ENV-WT(野生型),并利用重叠PCR将其miR-155作用位点AGCATTA突变为ATTCAAA,然后构建重组质粒pmirGLO-ALVE1-ENV-MU(突变型),同时将gga-miR-155前体序列构建至pcDNA3.1载体,获得重组质粒pcDNA3.1-gga-miR-155,将这些质粒共转染至DF-1细胞中,48 h后收集细胞并检测荧光素酶活性.结果发现:野生组能显著下调pmirGLO-ALVE1-ENV-WT荧光素酶活性,而对照组无显著改变;对照组和突变组均未能改变pmirGLO-ALVE1-ENV-MU荧光素酶活性.本研究证实gga-miR-155可直接靶向ALVE1 env转录物,为鸡内源性反转录病毒的调控机制提供了新的启示.