禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学分析方法的建立及应用

• 作者: 刘洋洋 孙振 宋成义 朱文奇 王宵燕 耿拓宇 胡序明 陈世豪 高波
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽内源性反转录病毒 DNA甲基化 表观遗传学
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 15-20
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.3
• 字数: 3011字
• 语种: 中文

摘要

根据NCBI公布的禽内源性反转录病毒ALVE1序列设计引物,以SPF鸡胚制备的成纤维细胞为生物材料,建立了ALVE基因序列分析、甲基化水平和转录表达检测方法.以鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast cell,CEF)和巨噬细胞系(HDll)两种细胞的基因组为模板,通过常规PCR扩增获得了1912 bp的扩增产物,测序后与内源性ALVE1序列比对,核苷酸同源性高达98％以上,说明扩增产物为内源性病毒序列.同时,利用焦磷酸测序分析LTR片段甲基化水平,结果显示,LTR在非免疫细胞CEF中的甲基化水平显著高于巨噬细胞系HD11.利用常规RT-PCR和荧光定量PCR在两种细胞均检测到禽内源性反转录病毒LTR基因、gag基因、pol基因和env基因的转录表达.本研究为今后分析禽内源性反转录病毒ALVE功能提供了方法,同时也为深入研究禽内源性反转录病毒ALVE表现遗传学调控机制奠定了基础.