橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化

• 作者: 刘洁琼 张春红 曾宪海 李哲 李运合 林位夫 贺永国 马晓晓 黄绵佳
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 橡胶树 HbHMGR1基因 乳管特异性启动子PHEV2.1 易碎愈伤组织 遗传转化
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 597-603
• 页数: 7页
• 分类号: S794.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.05.597

摘要

[目的]以3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶1基因(HbHMGR1)乳管表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1-HbHMGR1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织,获得抗性转基因材料,为研究HbHMGR1基因的乳管特异性表达及提高橡胶产量打下基础.[方法]用根癌农杆菌EHA105介导表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1-HbHMGR1转化橡胶树品种热研8-79花药易碎胚性愈伤组织,经卡那霉素筛选数月后,对抗性愈伤组织进行GUS染色和分子检测.[结果]经过对根癌农杆菌侵染的易碎愈伤组织进行4～6个月筛选,得到5个GUS检测呈阳性的抗性愈伤组织系;取其中的2号和11号抗性愈伤组织系进行PCR鉴定,均能扩增出与阳性对照相同的特异片段,uidA、NPTⅡ和PHEV2.1-HbHMGR1序列的目的片段大小分别为829、797和3592bp.2号和11号抗性愈伤组织系经反向PCR鉴定,发现2号抗性愈伤组织系未扩增出目的条带,而11号抗性愈伤组织系扩增获得一条约2000 bp的条带,包含T-DNA序列和一段未知的DNA序列,其中未知DNA序列是橡胶树品种热研8-79基因组的一段连续序列.[结论]将植物表达载体的T-DNA整合到抗性愈伤组织系基因组DNA中,可获得一个含35S-NPTⅡ-PHEV2.1-HbHMGR1-35S-uidA的转基因愈伤组织系.