金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶耐药基因的克隆及其原核表达

• 作者: 周帅 周珍文 张咏莉 谢永强 陈吟霜 陈洪升
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 腺苷酰转移酶 耐药基因
• 年，卷（期）: 2016,（19）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 2667-2669
• 页数: 3页
• 字数: 2404字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.003

摘要

目的：在大肠杆菌中克隆表达金黄色葡萄球菌氨基糖苷类耐药基因，即腺苷酰转移酶基因，为其功能研究奠定基础。方法按金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶蛋白编码序列设计引物，以金黄色葡萄球菌基因组 DNA 为模板，扩增腺苷酰转移酶基因，所得片段与 pGEX‐4t‐1（＋）载体连接，转化至感受态大肠杆菌 BL21（DE3），提取质粒进行双酶切及测序鉴定，IPTG 诱导重组蛋白表达，SDS‐PAGE 及 Western‐blot 对重组蛋白作鉴定。结果使用金黄色葡萄球菌基因组为模板，成功扩增约800 bp 目的片段，重组质粒双酶切见目的片段，测序显示腺苷酰转移酶基因长783 bp ，始于 ATG ，止于 TAG ，预测的等电点和相对分子质量分别为7．75和29×103，目的基因与 Genbank 腺苷酰转移酶同源性为99％，SDS‐PAGE 及 Western‐blot 显示在55×103见重组蛋白表达。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶基因。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张咏莉		39	254	9.0	14.0
2	谢永强		19	91	6.0	9.0
3	周珍文		4	31	3.0	4.0
4	陈洪升		5	27	2.0	5.0
5	周帅		1	0	0.0	0.0
6	陈吟霜		1	0	0.0	0.0