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摘要:
对生防菌吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007基因组上高GC基因PCR扩增体系进行探讨。通过对该菌株基因组进行100℃处理5 min; PCR反应体系为10μL,在体系中使用高保真LA Taq ( Mix)酶,并分别加入不同体积分数的DMSO、2× GC bufferⅠ、2× GC bufferⅡ,然后选用适当的PCR程序对产几丁质酶基因( bcc1, GC含量71.1%)进行扩增,在此基础上,选择最适体系对产ACC脱氨酶基因( acdS, GC含量66.86%)、内切葡聚糖酶基因( GC含量74.71%)、色氨酸单加氧酶基因( iaaM, GC含量6.62%)、嗜铁素合成相关基因( cepR, GC含量64.44%)进行PCR扩增,将扩增出的片段与PMD ?19-T vector连接后转化至大肠杆菌JM-109中进行测序。结果表明: JK-SH007菌株基因组经高温处理后,在PCR反应体系中加入10% DMSO可成功扩增出该菌株bcc1基因(2484 bp)。该体系同样适用于acdS、内切葡聚糖酶、 iaaM、 cepR等基因,而且测序结果与预期的序列一致。因此,该体系具有广泛性,而且简单可靠,成本低,扩增效率高,具有很强的实用性,为洋葱伯克霍尔德氏菌群菌株及其他菌株高GC含量基因的克隆提供了参考依据。
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文献信息
篇名 吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007高GC基因P CR体系的扩增研究
来源期刊 西南林业大学学报 学科 农学
关键词 吡咯伯克霍尔德氏菌 基因 测序 高GC PCR扩增
年,卷(期) 2017,(1) 所属期刊栏目 ?森林病虫害 Forest Disease and Pest?
研究方向 页码范围 130-137
页数 8页 分类号 S763.13
字数 5751字 语种 中文
DOI 10.11929/j.issn.2095-1914.2017.01.021
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 叶建仁 南京林业大学林学院 226 2554 25.0 37.0
2 任嘉红 长治学院生物科学与技术系 40 273 9.0 14.0
3 陈飞飞 南京林业大学林学院 3 1 1.0 1.0
4 张鹏飞 山西师范大学生命科学学院 5 8 2.0 2.0
8 吴伟 山西师范大学生命科学学院 3 3 1.0 1.0
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吡咯伯克霍尔德氏菌
基因
测序
高GC
PCR扩增
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期刊影响力
西南林业大学学报
双月刊
2095-1914
53-1218/S
云南昆明小坝白龙寺300号
chi
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2848
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