宫颈癌细胞放射损伤后IER5蛋白表达及其相互作用蛋白的筛选和验证

• 作者: 于新平 吴玉梅 周平坤 马腾
• 来源期刊: 中华放射医学与防护杂志
• 关键词: 宫颈癌 IER5 免疫共沉淀 质谱分析
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 放射生物学
• 页码范围: 246-250
• 页数: 5页
• 字数: 3333字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2017.04.002

摘要

目的 了解IER5蛋白经放射损伤后的表达变化,并筛选IER5蛋白在放射损伤后可能参与DNA损伤修复通路中的相互作用蛋白.方法 HeLa细胞经4 Gyγ射线照射后在不同时间点收集细胞,提取总蛋白质和细胞核蛋白行Western blot检验;构建3×Flag标签融合表达的IER5蛋白表达载体,转染人肾上皮细胞293T并照射,收集细胞行免疫沉淀富集IER5的结合蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离免疫共沉淀复合物,考马斯亮蓝染色观察差异条带并切胶酶解后行质谱分析,对可能相互作用蛋白结果进行Western blot验证.结果 IER5蛋白照后4h表达逐渐增加,12 h至高峰,持续至48 h;细胞核内IER5蛋白表达也有增加趋势;质谱分析数据表明,照射组检测出374个蛋白,对照组检测出256个蛋白,两组比较差异蛋白41个,照射组中包括与DNA结合、代谢、损伤修复相关的10个蛋白;其中,与DNA损伤修复密切相关的1型聚ADP核糖基化聚合酶(PARP1)得到Western blot验证.结论 IER5是放射损伤相关蛋白,其可能参与DNA损伤修复通路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周平坤	军事医学科学院放射与辐射医学研究所放射生物学北京市重点实验室	108	511	11.0	16.0
2	吴玉梅		122	790	15.0	21.0
3	于新平		8	31	4.0	5.0
4	马腾	军事医学科学院放射与辐射医学研究所放射生物学北京市重点实验室	1	3	1.0	1.0