稳定表达Aβ特异性单链抗体的哺乳动物细胞株构建和功能研究

• 作者: 何金生 宋琳琳 张莹 洪涛 温杰 王荷
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 阿尔茨海默病 β淀粉样肽(Aβ) 单链抗体
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: Q819
• 字数: 3993字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170201

摘要

构建可以稳定表达Aβ特异性单链抗体(scFv)的哺乳动物细胞株.应用重叠延伸PCR的方法,以前期建立的Aβ特异性单克隆抗体(A8)的轻、重链可变区基因为模板,构建scFv的基因片段,通过(G4S)3或p2A两种不同的连接肽(Linker)序列,拼接得到多种形式的scFv基因片段,用于构建真核表达载体.利用脂质体分别转染人宫颈癌细胞(Hela)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO),Western blot鉴定scFv的表达情况;以潮霉素筛选获得稳定表达抗Aβ的scFv细胞株,以间接ELISA和斑点印迹分析所得scFv的抗原识别能力;采用体外细胞实验,在超微病理水平分析所得scFv的细胞保护作用.结果:成功构建了Aβ特异性scFv的3个真核表达载体pSecTag2/HygroA-VL-(G4S) 3-VH、pSecTag2/HygroA-VH-(G4 S)3-VL和pSecTag2/HygroA-VL-p2A-VH,获得了2株稳定表达Aβ特异性scFv的细胞株Hela-VL-p2A-VH和CHO-VL-(G4S) 3-VH.Western blot结果表明了相应scFv的正确表达,间接ELISA和斑点印迹结果表明所分泌的细胞上清具有Aβ抗原识别能力,体外实验显示其具有阻断和抑制Aβ寡聚体细胞毒性的作用.稳定表达Aβ特异性单链抗体的细胞株有助于AD免疫治疗基础研究的进一步开展.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	洪涛	北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院	74	361	10.0	15.0
3	何金生	北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院	32	86	5.0	7.0
4	张莹	北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院	29	118	6.0	9.0
7	宋琳琳	北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院	2	3	1.0	1.0
8	王荷	北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院	3	3	1.0	1.0
9	温杰	北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院	1	3	1.0	1.0