与肝癌细胞系HepG2特异性结合单链抗体的筛选与序列分析

• 作者: 余冰 倪明 唐珍洁 张悦 朱慧芬 李文涵 沈关心 程欣 雷萍
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人源噬菌体抗体库 单链抗体 阴性筛选 阳性筛选 生物淘洗
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 肿瘤免疫学
• 页码范围: 179-182
• 页数: 4页
• 分类号: R733
• 字数: 3485字
• 语种: 中文

摘要

目的:从人源噬菌体抗体库中筛选与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体,为寻找肝癌细胞表面特异性标志及靶向研究奠定基础.方法:以正常肝细胞系L02为阴性筛选细胞,以肝癌细胞系HepG2为阳性筛选靶细胞,从人源噬菌体抗体库(Griffin.1 Library)经三轮筛选后,阳性菌质粒PCR确定其中含有单链抗体基因的克隆,通过细胞ELISA及FCM筛选特异性的单链抗体噬菌体,通过ABI3730全自动荧光测序仪测序,并通过GeneBank比对进行同源性分析,IPTG诱导可溶性单链抗体表达,并检测其与肝癌细胞株结合的特异性.结果:获得了2个特异性较高的阳性噬菌体单个克隆.经DNA测序后, 在Genebank中与人的免疫球蛋白库进行比对,并用IMGT/V-Quest软件进行分析,确定为2个插入序列不同的单链抗体片段.经细胞ELISA证明其阳性克隆菌培养上清可与肝癌细胞株特异性结合.获得的序列成功登陆Genebank,序列号为AY686498-AY686499.结论:从人源噬菌体抗体库中筛选到与肝癌细胞系HepG2特异性结合的具有功能活性的单链抗体,为进一步寻找肝癌细胞表面特异性抗原及靶向研究奠定了基础.