S.suis 2中国强毒株烯醇化酶Enolase基因的分子克隆及蛋白生物功能研究

• 作者: 孙雯 郑峰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 猪链球菌2型(S.suis2) 烯醇化酶 酶活性 流式细胞术 外周血单核细胞
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 222-230
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.04.029

摘要

对中国强毒株S.suis 2烯醇化酶Enolase进行克隆表达、定位分析、酶活性检测及免疫相关功能研究,探讨Enolase在S.suis 2致病中的作用.基于S.suis 205ZYH33全基因组测序,对Enolase编码基因进行生物信息学分析.构建pET32a∷eno重组表达质粒,转化入E.coli BL21中诱导表达,利用His-Beads和FPLC纯化后获得Enolase重组蛋白.对纯化后的Enolase进行酶活性检测,鉴定其糖代谢功能.然后利用FCM分析Enolase在S.suis 2的定位情况,最后通过外周血单核细胞MTT实验检测Enolase对PBMCs活性的影响.同源性分析发现S.suis 2 eno与多种细菌中eno高度同源.SignalP和TMHMM分析发现Enolase没有信号肽也没有跨膜区.eno分子克隆并测序显示长度为1308 bp.重组质粒经诱导表达并纯化后,获得75 kD的Enolase蛋白.纯化的重组Enolase有将2-PEG转化成PEP的能力.FCM分析表明Enolase也存在于细菌表面.MTT测试表明Enolase能够引发PBMCs活性的下降.Enolase不仅在S.suis 2体内参与基础代谢活动,同时也存在于S.suis 2表面,可能通过破坏单核细胞参与感染过程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑峰		4	6	1.0	2.0
2	孙雯		7	7	1.0	2.0