伪狂犬病病毒微滴数字PCR定量检测方法的建立

• 作者: 亢文华 倪建强 原霖 汪葆玥 王静 訾占超 陈亚娜
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病病毒 微滴数字PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1705-1710
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 4008字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.09.015

摘要

为了建立伪狂犬病病毒(PRV)微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的检测方法,以伪狂犬病病毒gB基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR方法.对ddPCR反应中的引物浓度、探针浓度、退火温度进行了优化.对建立的ddPCR方法的特异性和敏感性也进行测定,并且应用于临床样品的检测.结果表明,ddPCR的最佳引物浓度为0.9μmol·L-1,探针浓度为0.25 μmol·L-1,退火温度为60℃.ddPCR方法线性相关系数(R2)为0.998,显示呈良好的线性关系.检测限为6.1 copies·μL-1,比荧光定量PCR (Real Time PCR,qPCR)的检测限低,变异系数为2.81 ％,与其他病毒无交叉反应.通过对临床样品的检测,与病毒分离比较,ddPCR方法的敏感性为87.5％,特异性为96.2％,符合率为97％.结果表明新建立的ddPCR方法,敏感性高、特异性强,可用于伪狂犬病病毒的定量检测.