重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用

• 作者: 吴洁 庄昉成 朱赟 罗永能 许玲敏 陈刚 高丽美 高孟
• 来源期刊: 国际生物制品学杂志
• 关键词: 重组蛋白类 佐剂,免疫 人乳头瘤病毒16 乳头状瘤病毒疫苗
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 68-74
• 页数: 7页
• 字数: 5917字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2017.02.004

摘要

目的 研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4-1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus-16,HPV16)蛋白疫苗(HPV16蛋白疫苗)免疫效果的影响.方法 对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点定向插入pET28a表达载体.将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达.用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构.用CCK-8试剂盒检测纯化r4-1BBL对小鼠T细胞体外增殖的影响.同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响.结果 密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在.可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构.纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖.与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4-1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021).结论 r4-1BBL能在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴洁	浙江省医学科学院病毒病研究所	12	15	2.0	3.0
2	庄昉成	浙江省医学科学院病毒病研究所	28	152	7.0	12.0
3	高丽美	浙江省医学科学院病毒病研究所	19	29	3.0	5.0
4	许玲敏	浙江省医学科学院病毒病研究所	5	12	2.0	3.0
5	高孟	浙江省医学科学院病毒病研究所	19	48	4.0	6.0
6	罗永能	浙江省医学科学院病毒病研究所	17	65	5.0	7.0
7	陈刚	浙江省医学科学院病毒病研究所	6	3	1.0	1.0
8	朱赟	浙江省医学科学院病毒病研究所	5	32	3.0	5.0