脊神经结扎术后脊髓背角小胶质细胞中miR-195的表达及其对自噬水平的影响

• 作者: 史国栋 史建刚 孙晨曦 孙璟川 杨勇 闫廷飞
• 来源期刊: 中国脊柱脊髓杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微核糖酸-195 小胶质细胞 自噬相关基因14 自噬 神经结扎术 大鼠
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1030-1036
• 页数: 7页
• 分类号: R322.81
• 字数: 4790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-406X.2017.11.12

摘要

目的:探讨大鼠脊神经结扎术后脊髓背角小胶质细胞中微核糖核酸-195 (microRNA-195,miR-195)的表达及其对自噬水平的影响与调节机制.方法:32只成年雄性SD大鼠随机分为脊神经结扎组(SNL组)和假手术组(S组),每组16只,SNL组结扎L5段神经制备脊神经结扎模型,造模后1d、3d、5d、10d两组各处死4只大鼠,分离脊髓腰膨大,采用Percoll梯度离心法分离脊髓背角小胶质细胞,Real-time PCR检测两组各时间点脊髓背角小胶质细胞的miR-195表达水平.取12只成年雄性SD大鼠,处死后取脊髓腰膨大,分离脊髓背角小胶质细胞,分为两组,一组采用脂质体法转染miR-195模拟物,另一组加入转染试剂,检测两组小胶质细胞自噬体膜标记蛋白轻链3(light chain 3,LC3)的表达水平;再取小胶质细胞分为三组,分别将含有野生型及突变型自噬相关基因14(ATG14)3'非编码区(3'UTR)的报告基因质粒、pRL-TK质粒miR-195模拟物和对照转入HEK 293细胞培养48h,荧光显微镜下观察miR-195的直接作用靶点,并检测三组ATG14蛋白的表达.取24只健康SD大鼠脊髓腰膨大,分离脊髓背角小胶质细胞,分为三组分别转染miR-195模拟物、抑制物和转染试剂,培养48h,采用免疫蛋白印记(Westem blot)法检测三组ATG14蛋白的表达水平;再取小胶质细胞分为三组,分别转染pEGFP-LC3、pEGFP-LC3+miR-195模拟物及pEGFP-LC3+miR-195模拟物+pCMV-ATG14培养48h,染色后荧光显微下观察自噬斑点数量.结果:SNL组各时间点大鼠脊髓背角小胶质细胞中miR-195表达均明显上调,与同时间点S组比较均有显著性差异(P＜0.05).转染miR-195模拟物后,LC3的表达水平(0.61±0.07)较对照组(1.21±0.08)显著性降低(P＜0.05).转入野生型ATG14 3'UTR的报告基因质粒的HEK 293细胞的荧光强度较对照显著性减弱(0.65±0.04 vs 1.01±0.01,P＜0.05),突变型与对照无显著性变化(0.99±0.03 vs1.00±0.02,P＞0.05).转染miR-195模拟物后小胶质细胞中ATG14的表达显著性降低(P＜0.05);转染miR-195抑制物后ATG14的表达显著性升高(P＜0.05).转染pEGFP-LC3与pEGFP-LC3+miR-195模拟物较转染pEGFP-LC3+miR-195模拟物+pCMV-ATG14时自噬数量降低(P＜0.05).结论:miR-195在大鼠脊神经结扎模型脊髓背角小胶质细胞中高表达,降低自噬蛋白LC3表达;ATG14蛋白受miR-195负调控,miR-195可能通过降低ATG14的表达抑制小胶质细胞自噬.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史建刚	第二军医大学附属长征医院骨科	99	541	13.0	18.0
2	史国栋	第二军医大学附属长征医院骨科	29	207	8.0	13.0
3	杨勇	第二军医大学附属长征医院骨科	19	81	5.0	8.0
4	闫廷飞	第二军医大学附属长征医院骨科	10	97	4.0	9.0
5	孙晨曦	第二军医大学附属长征医院骨科	7	51	3.0	7.0
6	孙璟川	第二军医大学附属长征医院骨科	11	36	3.0	5.0