ORFV和Mo双重PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 林裕胜 江斌 江锦秀 游伟 胡奇林
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 羊传染性脓疱病毒(ORFV) 绵羊肺炎支原体(Mo) 双重PCR
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1374-1380
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 字数: 4887字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.08.018

摘要

羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)是羊传染性脓疱病(Contagious ecthyma,CE)的病原,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)是羊支原体性肺炎(Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS)的主要病原,近年来此两种病原混合感染日益增多,目前采用单一PCR方法检测这两种病原,临床上迫切需要能同时快速检测这两种病原的方法.为了建立能够直接从样品中同时检测ORFV核酸和Mo核酸的双重PCR方法,本研究根据ORFV的主要膜蛋白B2L基因(major envelope protein B2L gene)和Mo的膜蛋白P80基因(membrane protein P80 gene)序列,设计合成了2对特异性引物.结果显示,该方法可以同时扩增出ORFV的402 bp和Mo的700 bp特异性片段,而对其他常见病原的DNA模板均无扩增,显示出良好的特异性,该方法对ORFV和Mo的最低检出量分别为1.1×103 copies/μL和3.47× 103 copies/μL,比单一PCR敏感10倍.对来自福建省部分羊场的883份病山羊(Capra hircus)临床样品进行检测,双重PCR检出ORFV阳性样品28份(阳性率为33.7％),Mo阳性样品33份(阳性率为39.8％),同时感染ORFV和Mo的阳性样品9份(阳性率为10.8％),检测结果与单一ORFV和Mo PCR结果一致.本研究所建立的双重PCR方法可用于ORFV和Mo的临床检测,为CE和MPGS的临床快速鉴别诊断和流行病学调查提供了有效的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江斌	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	133	303	8.0	11.0
2	胡奇林	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	57	410	11.0	17.0
3	林裕胜	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	40	164	8.0	11.0
4	江锦秀	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	30	100	5.0	8.0
5	游伟	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	27	76	5.0	7.0