稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白细胞的构建

• 作者: 刘振卫 周荣 曾军 李小锋 李潇 苏晓波 黄文波
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型流感病毒 血凝素(HA)蛋白 细胞株
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 人类病毒研究论著
• 页码范围: 494-500
• 页数: 7页
• 分类号: R373.1+3
• 语种: 中文

摘要

获得稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞株.采用RT-PCR方法扩增乙型流感病毒的HA基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建pcDNA3.1(+)-HA重组质粒.将已鉴定正确的pcDNA3.1(+)-HA质粒与辅助质粒PLV-EF1a-EGFP(2A) Puro通过脂质体介导法共转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选后得到重组细胞株HEK293-HA,通过流式细胞术法(FCM)来检测细胞中HA的表达情况.所得到的重组细胞经扩大培养后再连续培养15代,采用间接免疫荧光法(IFA)和蛋白免疫印迹法(WB)来检测HA蛋白表达的稳定性.结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-HA经双酶切及测序鉴定正确;共获得3株高表达阳性细胞株.细胞扩大培养后连续传代培养15代后进行Western blot和IFA检测结果表明,重组细胞的HA蛋白得到稳定的表达.已成功获得了能稳定表达乙型流感病毒血凝素蛋白的HEK-293-HA细胞,可为乙型流感病毒HA蛋白的进一步研究提供良好的基础.