高选择性不对称还原N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺的重组氧化还原酶催化性质及其酶促转化

• 作者: 徐岩 李斌 聂尧
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 氧化还原酶 生物催化 不对称还原 (S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺 酶学特性
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 工业微生物
• 页码范围: 1-8
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160201

摘要

[目的]通过表达多种重组立体选择性氧化还原酶,分析其催化不对称还原N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)的性质,从而构建酶促合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DHTP)的反应体系.[方法]基于已有立体选择性氧化还原酶重组大肠杆菌,通过Ni离子亲和层析法纯化得到重组氧化还原酶,以DKTP为底物,考察不同重组氧化还原酶对DKTP的催化活性和选择性,进一步对高选择性酶促合成(S)-DHTP的重组酶CR2进行性质分析,并考察其在最适条件下不对称还原DKTP的过程.[结果]筛选获得产物构型为(S)-型的催化活性最高的酶为CR2,该酶米氏常数Km为0.135 mmol/L,kcat/Km为3.689 L/(mmol·s),最适pH 8.4 (0.1 mol/L三乙醇胺缓冲液),最适反应温度为35℃,在10-45℃条件下和pH 7.5-8.5较为稳定,Zn2+离子对酶活有促进作用.CR2催化DKTP不对称还原反应6h后,DHTP的产率达92.1％、光学纯度达99.9％.[结论]基于活性和选择性分析,获得不对称还原DKTP的目标酶CR2,其催化特性有利于高立体选择性还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-DHTP,从而为进一步提高酶促不对称还原DKTP的转化效率提供研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐岩	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	233	3264	31.0	46.0
5	聂尧	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	34	150	7.0	10.0
6	李斌	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室	7	133	4.0	7.0