人转铁蛋白受体特异性单克隆抗体的研制及其初步鉴定

• 作者: 刘云 刘晓波 刘晓芬 吴强 张萃 汪琦 翟源惠
• 来源期刊: 广东药学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人转铁蛋白受体(TfR) 小鼠杂交瘤细胞 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 药学研究
• 页码范围: 403-407
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 3299字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2017030302

摘要

目的 建立能分泌人转铁蛋白受体(TfR)特异性抗体的杂交瘤细胞株,并对其分泌的抗体进行初步鉴定. 方法 将人肝癌细胞株HepG2分离纯化的TfR蛋白,采用常规法免疫BALB/C小鼠;采用间接ELISA法测定免疫血清抗体效价;采用常规聚乙二醇(PEG)介导法,将免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合,用含HAT培养基筛选杂交瘤细胞;采用间接ELISA和Cell-ELISA法筛选TfR抗体阳性的杂交瘤细胞;采用有限稀释法进行克隆和多次亚克隆以建立稳定分泌TfR抗体的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注射经石蜡油致敏的小鼠腹腔以产腹水抗体,采用硫酸-辛酸法纯化腹水抗体;采用秋水仙素处理,计数细胞染色体数以进行杂交瘤细胞鉴定;采用免疫荧光染色法和Western blot法初步鉴定抗体与细胞表面或细胞总蛋白中TfR的结合. 结果 提取纯化的人TfR蛋白免疫小鼠获得成功,其1∶5 000稀释的血清抗体光吸收值(A490)是对照小鼠血清(1∶200稀释)的16倍以上;细胞融合率为42.22%,其中TfR抗体阳性孔20个,抗体阳性率为13.16%;抗体阳性孔B6和孔E8中杂交瘤细胞经克隆和亚克隆后建立起稳定分泌抗体的细胞株;B6杂交瘤细胞染色体数量位于56~60条之间,应为B细胞和SP2/0细胞融合而来;腹水抗体染色使HepG2细胞表面出现明亮荧光,并且能使HepG2细胞提取的总蛋白电泳图谱在95 000处出现清晰条带,表明该杂交瘤细胞分泌的抗体能特异性结合TfR蛋白.结论 分泌抗人TfR抗体的小鼠杂交瘤细胞株已被筛选和建立;其分泌的抗体能与HepG2细胞的TfR特异性结合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘云	川北医学院基础医学院	65	202	7.0	11.0
2	刘晓芬	广东药科大学基础学院	3	1	1.0	1.0
3	吴强	广东药科大学基础学院	2	1	1.0	1.0
4	刘晓波	广东药科大学基础学院	7	7	2.0	2.0
5	张萃	广东药科大学基础学院	3	2	1.0	1.0
6	汪琦	广东药科大学基础学院	3	4	1.0	1.0
7	翟源惠	广东药科大学基础学院	1	1	1.0	1.0