利用Gateway技术筛选Candidatus Liberibacter asiaticus致病相关基因研究

• 作者: 丁芳 刘敏 欧阳立力 洪霓 王世玲 王国平 钱艳杰
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄龙病菌 Candidatus Liberibacter asiaticus 致病相关基因 Gateway技术
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 致病性与抗病性遗传
• 页码范围: 816-823
• 页数: 8页
• 分类号: S432.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000112

摘要

柑橘黄龙病是危害全球柑橘产业健康发展的最严重病害之一,病原为韧皮部限制性细菌,我国的柑橘黄龙病由亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CaLas)引起.由于该病原菌难以获得离体纯培养,从而限制了其致病分子机制的研究.本试验根据已经报道的植物病原细菌致病相关基因特点,从黄龙病菌亚洲种Psy62菌株全基因组序列(Psy62:NC_012985.1)中选取3个假定致病相关基因,分别标记为PalCaLas、MotCaLas和Hly CLas,利用Gateway技术的同源重组原理,将3个基因通过BP反应和LR反应,分别构建到植物表达载体psk103中,接种本生烟(Nicotiana benthamiana)后,通过瞬时表达筛选可诱导N.benthamiana产生过敏性坏死反应的功能基因.经过PCR克隆和测序验证,PalCaLas,、MotCaLas和HlyCaLas基因均成功构建至植物表达载体上.本生烟瞬时表达试验证实:当含有目的基因的根癌农杆菌菌悬液OD600值介于0.6～0.8,测试本生烟苗龄6周左右,PalCaLas基因在接种4 dpi时可引发明显的HR(hypersensitive reaction)反应,12 dpi时HR反应更为强烈.同等条件下MotCaLas和HlyCaLas均不能引发类似反应.由此证实,Gateway技术可成功用于筛选CaLas致病相关基因,PalCALas基因可能在CaLas致病过程中发挥重要作用.该报道为国内首次采用Gateway技术进行CaLas致病相关基因功能研究,为后续开展CaLas病原寄主互作分子机制研究奠定了基础.