不结球白菜BrCDF1的克隆和蛋白亚细胞定位及其与BrFKF1蛋白的互作验证

• 作者: 侯喜林 刘同坤 吴小婷 张昌伟 李英 沈振国 邵帅旭
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 不结球白菜 BrCDF1 亚细胞定位 酵母双杂交 双分子荧光互补
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 812-819
• 页数: 8页
• 分类号: S634.3
• 字数: 6718字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201612049

摘要

[目的]本文旨在揭示CDF1基因在不结球白菜(Brassica rapa ssp.chinensis)抽薹开花过程中的调控机制,验证其是否与FKF1蛋白发生互作.[方法]以‘苏州青’为材料,采用同源克隆方法获得BrCDF1基因全长序列,并与其他物种进行氨基酸序列比对;将BrCDF1与报告基因YFP融合构建亚细胞定位载体pEarlyGate 101-BrCDFI-YFP,采用农杆菌介导的方法将其瞬时表达于本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片中;激光共聚焦显微镜观察,利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术验证不结球白菜BrCDF1和BrFKF1蛋白是否存在互作.[结果]BrCDF1基因含有876 bp开放阅读框,编码292个氨基酸.与甘蓝型油菜(Brassica napus)、野甘蓝(原变种)(Brassica oleracea var.oleracea)、萝卜(Raphanus sativus)的氨基酸序列比对结果显示:BrCDF1在进化过程中的保守程度分别为91.11％、88.25％、84.76％,保守性较高.BrCDF1蛋白定位于细胞核中,BrCDF1和BrFKF1之间存在相互作用.[结论]BrCDF1定位于细胞核,并且与BrFKF1互作,在进化过程中保守性较高,并可能参与了不结球白菜的光周期开花途径.