去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在哺乳动物细胞胞浆的表达

• 作者: 孟兴 彭蔚宇 杨柳 王丽廷 王兴童 陈洪岩 韩凌霞
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡白细胞介素-10 信号肽 真核表达 CHO-K1细胞
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 16-20,25
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 3657字
• 语种: 中文

摘要

目的 分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达ehIL-10的细胞系.方法 采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchI L-10F)和去信号肽(euchIL-10M)的chIL-10编码基因,克降入含有报告基因eGFP和新霉素抗性基因(neo)的真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒N1-euchIL-10F和N1-euchIL-10M.分别转染中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1),经G418加压筛选、纯化,获得稳定表达chIL-10蛋白的CHO-K1细胞系,利用激光共聚焦试验观察外源蛋白的细胞定位.结果 通过RT-PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验,表明euchIL-10F和euchIL-10M均整合入细胞基因组中,且N1-euchIL-10M在胞浆大量表达较强的绿色荧光,而N1-euehIL-10F表达的荧光较弱,且胞浆内含量很低.结论 去除信号肽利于chIL-10基因在体外真核细胞胞浆的表达.