家蚕表皮蛋白BmCPAP3-G的表达特征及其与几丁质的结合特性

• 作者: 张守亚 张晓璐 张艳 张薇薇 董照明 赵萍
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 家蚕 表皮蛋白 CPAP 表达谱 几丁质结合
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 1723-1733
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.09.018

摘要

[目的]探讨家蚕(Bombyx mori)表皮蛋白BmCPAP3-G的表达特征及与几丁质的结合方式,为家蚕表皮蛋白的功能研究提供依据.[方法]应用生物信息学方法分析家蚕CPAP家族表皮蛋白及BmCPAP3-G的结构域的序列特征;利用原核表达的方法表达BmCPAP3-G的融合蛋白,通过镍柱亲和层析技术纯化可溶性蛋白,利用5800 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定正确后进行多克隆抗体制备,并利用几丁质亲和层析技术验证BmCPAP3-G与几丁质的结合;利用半定量RT-PCR和Western blot方法对BmCPAP3-G的组织和时期表达情况进行检测;利用几丁质亲和层析技术探讨体外BmCPAP3-G的结构域与几丁质结合能力强弱的关系.[结果]BmCPAP3-G蛋白具有18个氨基酸组成的信号肽,分子量为27 kD,等电点为4.82,位于第15号染色体上,由3个相同的ChtBD2结构域组成,并且其结构域中的半胱氨酸和芳香族氨基酸的同源性较高;对BmCPAP3-G进行了克隆和原核表达,并利用镍柱亲和层析技术纯化到了较纯的可溶性蛋白,经5800 MALDI-TOF/TOF鉴定正确后制备了其多克隆抗体,通过几丁质亲和层析技术验证了BmCPAP3-G能够与几丁质进行结合;利用半定量RT-PCR和Western blot的方法对BmCPAP3-G的组织和时期表达情况进行检测,发现转录水平和蛋白水平的结果一致,BmCPAP3-G在头和表皮中的表达量较高,在中肠、生殖腺和丝腺中的表达量较低,从表皮和丝腺的时期表达情况分析BmCPAP3-G在4龄眠期的表达量最高,随着5龄期的进行表达量呈逐渐下降的趋势;为了探讨BmCPAP3-G结构域与几丁质结合的关系,对该蛋白的结构域进行原核表达及镍柱亲和层析纯化,成功纯化了有活性的结构域3、结构域1-2、结构域2-3,将这3个结构域进行几丁质亲和层析验证其与几丁质的结合能力,发现它们均能够与几丁质进行结合,但是结合能力有差异,结构域3相比于结构域1-2和结构域2-3的结合能力要弱,即两个结构域比单个结构域与几丁质的结合能力强.[结论]BmCPAP3-G为典型的CPAP家族的表皮蛋白,可能参与几丁质层在眠期的降解再形成过程.BmCPAP3-G单个ChtBD2结构域就能够与几丁质结合,但多个结构域的同时存在加强了其与几丁质的结合能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵萍	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	33	235	9.0	14.0
2	张艳	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	46	166	6.0	11.0
3	张薇薇	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	6	37	2.0	6.0
4	董照明	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	5	11	2.0	3.0
5	张晓璐	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	2	5	1.0	2.0
6	张守亚	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	1	4	1.0	1.0