人轮状病毒G1P[8]型感染树鼩原代小肠上皮细胞模型的建立

• 作者: 代解杰 冯悦 夏雪山 张阿梅 彭杰 李道群 牛华 王文广 甸子芩
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 树鼩原代小肠上皮细胞 轮状病毒 病毒增殖特性 VP6蛋白
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 111-116
• 页数: 6页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.001

摘要

目的 探究树鼩原代小肠上皮细胞的增殖特性,建立人轮状G1P[8]型病毒体外感染树鼩原代小肠上皮的细胞模型.方法 采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶I联合消化法获取树鼩原代小肠上皮细胞,经纯化和鉴定,用人轮状G1P[8]型病毒感染细胞,测定培养上清的病毒滴度和载量,并用Western blot和间接免疫荧光检测法检测人轮状病毒G1P[8]型VP6蛋白的表达情况,评价人轮状G1P[8]型病毒体外对树鼩原代小肠上皮细胞的感染性.结果 分离的树鼩原代小肠上皮细胞经传代培养纯化,获得纯度达90%树鼩原代小肠上皮细胞.对树鼩原代小肠上皮细胞、原代肾细胞、HCT116细胞和MA104细胞进行轮状病毒易感性比较,确定树鼩原代小肠上皮细胞可以被人轮状病毒G1P[8]感染,培养72 h时病毒滴度可达到2.0×105 TCID 50/mL.经Western blot和间接免疫荧光发现在人轮状G1P[8]型病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞1~5 d均能检测到人轮状病毒VP6蛋白的表达和分布.结论 确立了树鼩原代小肠上皮细胞的分离、纯化与培养方法,并建立了人轮状G1P[8]型病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞的体外模型.