根癌土壤杆菌介导的假禾谷镰刀菌遗传转化体系的优化

• 作者: 丁胜利 张盼盼 李洪连 袁虹霞 邢小萍 陈琳琳
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 假禾谷镰刀菌 绿色荧光蛋白 遗传转化
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1887-1894
• 页数: 8页
• 分类号: S432.2+3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.11.016

摘要

假禾谷镰刀菌(Fusarium pseudograminearum)可引起小麦(Triticum aestivum)茎基部腐烂,对生产造成严重危害.研究病原菌与小麦的互作机制,培育抗病品种是防治病害有效措施.本研究以根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化假禾谷镰刀菌,获得能够稳定表达绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)的假禾谷镰刀菌的转化菌株,以假禾谷镰刀菌WZ-8A的分生孢子和菌丝体为转化受体,利用携带pCAM-GFP-hyg质粒的根癌土壤杆菌介导转化,对转化体系进行了优化.在转化后,将获得的转化子在不含潮霉素B (hygromycin B,hyg)的PDA培养基上连续培养5代,然后随机选取转化菌株,分别进行hyg引物PCR、hyg探针Southern blot分析、荧光显微镜观察、致病力及稳定性测定.结果表明,优化的假禾谷镰刀菌转化体系为:以106个/mL分生孢子悬浮液为转化受体,共培养培养基中CaCl2浓度2.6× 10-2g/L,在28 C,共培养48 h时转化效率较高(平均转化率为42个转化菌株/1 06个孢子).对随机选取的转化菌株进行分子生物学和荧光显微验证及致病性测定,证实携带GFP基因的T-DNA质粒以单拷贝的形式插入假禾谷镰刀菌的基因组,转化菌株的致病力未减弱.优化的根癌土壤杆菌介导的假禾谷镰刀菌遗传转化体系,可用于病原菌致病机制和小麦品种抗病机制的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邢小萍	河南农业大学植物保护学院	67	920	18.0	26.0
2	李洪连	河南农业大学植物保护学院	148	2274	27.0	40.0
3	袁虹霞	河南农业大学植物保护学院	80	1381	22.0	33.0
4	张盼盼	河南农业大学植物保护学院	4	4	1.0	2.0
5	陈琳琳	河南农业大学植物保护学院	5	3	1.0	1.0
6	丁胜利	河南农业大学植物保护学院	3	1	1.0	1.0