豚鼠骨髓间充质干细胞培养及体外转染神经营养因子-3的研究

• 作者: 张杰 秦华丽 蒋明
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 神经营养因子-3 脂质体2000 基因转染
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 353-358
• 页数: 6页
• 分类号: Q813|R764.4
• 字数: 4332字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11798/j.issn.1007-1520.201704014

摘要

目的 建立豚鼠骨髓间充质干细胞(bone-mesenchymal stem cells,BMSCs)的体外培养体系,体外脂质体2000介导神经营养因子-3(neurotrophieactor-3,NT-3)转染BMSCs,为内耳移植提供前期研究基础.方法 ①采用全骨髓贴壁法培养豚鼠BMSCs并传代,取P3代做生长曲线图,流式细胞仪上检测BMSCs的表面标志物CD29,CD90以及造血细胞表面标志物CD45;②按照不同质粒-脂质体配比介导pEGFP-N1-NT3转染P3代BMSCs,转染后48 h计算转染效率,选择最佳配比将pEGFP-N1-NT3质粒转染P3代BMSCs,转染后1、3、7、14 d,观察其荧光表达情况;③转染后3d的BMSCs提取蛋白,Western Blot验证NT-3蛋白表达.结果 ①全骨髓贴壁法获得细胞数量多,增殖快,传代可以纯化细胞.生长曲线符合Logistic生长曲线.流式细胞仪检测细胞CD29和CD90阳性表达,CD45阴性表达,符合BMSCs特征;②不同配比中质粒:脂质体为4μg:12μl时转染率最高,为最佳配比;③转染后48 h荧光表达较强,7d荧光表达但较前明显减弱,14 d基本未见明显荧光表达.Western Blot验证NT-3基因成功表达.结论 ①全骨髓贴壁法可以成功培养出增殖快,细胞纯度高的BMSCs;②脂质体法成功介导NT-3真核质粒在BMSCs内表达,BMSCs可能作为内耳基因治疗的理想载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋明	中南大学湘雅三医院耳鼻咽喉头颈外科	25	205	9.0	14.0
2	秦华丽	长沙市妇幼保健院眼耳鼻咽喉科	2	1	1.0	1.0
3	张杰	温州医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科	7	17	2.0	4.0